Außer der Hydrolasedomäne, die allen α/β-Hydrolase Enzymen gemein ist, besitzt die MHETase eine große Lid-Domäne ('Deckel'), die für die Substratspezifität verantwortlich ist.
Der am Testtag eingenommene Fluoreszein-Dilaurinsäureester wird (mit Hilfe von Gallensäuren) durch eine bauchspeicheldrüsenspezifische Esterase (Sterinester-Hydrolase) gespalten.